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异硫氰酸胍与硫氰酸胍的区别
物品单位 品牌
千克 卡诺斯
  • 产地:湖北武汉
  • 货号:kns2012011001
  • cas:593-84-0
  • 发布日期: 2021-01-28
  • 更新日期: 2021-01-28
产品详细说明
产地 湖北武汉
货号 kns2012011001
EINECS编号 209-812-1
品牌 卡诺斯
用途 生化试剂
CAS编号 593-84-0
别名 硫氰酸胍
纯度 99.%
规格 化学试剂
分子式 C2H4N4S
级别 工业级
产品英文名称 Guanidine thiocyanate

异硫氰酸胍,一种蛋白变性剂,在RNA提取过程用于灭活内源性RNases。

中文名称:硫氰酸胍中文别名:异硫氰酸胍英文名称:Guanidine thiocyanate英文别名:Guanidine isothiocyanate; Guanidinium Isothiocyanate; Thiocyanic acid, compd. with guanidine (1:1); GTC; guanidine thiocyanate (1:1); 2-(cyanosulfanyl)guanidine

CAS号:593-84-0EINECS号:209-812-1

分子式:C2H4N4S

分子量:116.145InChI:InChI=1/C2H4N4S/c3-1-7-6-2(4)5/h(H4,4,5,6)

密度:1.57g/cm3

熔点:118-122℃

沸点:290.6°C at 760 mmHg

闪点:129.5°C

蒸汽压:0.00206mmHg at 25°C


物化性质:熔点 118-122°C

产品用途:主要用于生物医药,化学试剂等

动物组织细胞总RNA的提取(异硫氰酸胍法和TRIzol法)

一、实验原理
RNA是基因表达的中间产物,存在于细胞质与核中。对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。获得高纯度和完整的RNA 是很多分子生物学实验所必需的,如Northern杂交、cDNA合成及体外翻译等实验的成败,在很大程度上取决于RNA的质量。由于细胞内的大部分RNA是以核蛋白复合体的形式存在,所以在提取RNA时要利用高浓度的蛋白质变性剂,迅速破坏细胞结构,使核蛋白与RNA分离,释放出RNA。再通过酚、氯仿等有机溶剂处理、离心,使RNA与其他细胞组分分离,得到纯化的总RNA。在提取的过程中要抑制内源和外源的RNase活性,保护RNA分子不被降解。因此提取必须在无RNase的环境中进行。可使用RNase抑制剂,如DEPC是RNase的强抑制剂,常用来抑制外源RNase活性。提取缓冲液中一般含SDS、酚、氯仿、胍盐等蛋白质变性剂,也能抑制RNase活性。并有助于除去非核酸成分。
本实验介绍异硫氰酸胍法和TRIzol法提取动物组织总RNA并通过电泳进行鉴定。
二、仪器和试剂
1.仪器:
超净工作台、高速冷冻离心机、电泳仪、紫外分光光度计、凝胶成像系统、振荡器、移液器、吸头、Ep管、玻璃匀浆器、试管、
玻璃器皿洗净后置180℃烘烤8h;不耐高温的器皿(如塑料制品)应用0.1% DEPC浸泡2h,70~80℃ 烘烤干燥,120℃高压20min,再70~80℃烘烤干燥方可使用。
2.试剂:
(1)细胞裂解液:
异硫氰酸胍 4mol/L
柠檬酸钠(pH7.0) 25mmol/L
十二烷基肌氨酸钠 0.5%
β-巯基乙醇 0.1mol/L
称取柠檬酸钠0.64g,十二烷基肌氨酸钠0.415g,吸取β-巯基乙醇0.7ml,用无Rnase的蒸馏水溶解,定容至50ml。然后取以上配制的溶液(CBS液)33ml,异硫氰酸胍 25g,混合,完全溶解后4℃保存备用。
(2)10×凝胶缓冲液:
吗啉代丙璜酸(MOPS)(pH7.0) 200mmol/L
NaAc 100mmol/L
EDTA(pH 8.0) 10mmol/L
过滤除菌后避光保存。
(3)5×变性上样缓冲液:
水饱和的溴酚蓝 16μl
500mmol/LEDTA(pH 8.0) 80μl
甲醛(37%) 720μl
甘油 2ml
甲酰胺 3084μl
10×凝胶缓冲液 4ml
加无RNase水至10ml,4℃可保存3个月。
(4)TRIzol RNA抽提试剂
(5)2mol醋酸钠
(6)0.1% DEPC
(7)平衡酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)
(8)平衡酚、氯仿
(9)无水乙醇、70%乙醇、异丙醇
(10)无RNase水
三、操作步骤
(一)异硫氰酸胍法(PLT)
1.取新鲜动物组织0.1~0.2g置于组织匀浆器中,加入预冷的细胞裂解液1ml,在冰浴中迅速匀浆15~30s,以充分研碎组织。然后将细胞悬浮液吸入另一试管中。
2.加入2mol醋酸钠(pH4.0)120μl,充分混匀。
3.加入1.2ml酚:氯仿:异戊醇,充分混匀摇振10s,冰浴15min。
4.将混合物转移至1.5ml Ep管中,4℃,离心10 000r/min,20min.
5.移取上层水相至另一Ep管中,加入等体积的异丙醇,静置?C20℃,30min沉淀RNA.
6. 4℃,离心12 000r/min,15min.
7. 弃上清液,加入70%乙醇400μl,洗涤RNA沉淀物;如果RNA沉淀物被悬浮,则4℃ 离心10 000r/min,10min。
8. 弃上清液,自然干燥,但应避免沉淀完全干燥,否则RNA难以溶解。
9.加入100μl无RNase水重悬RNA,或加1ml无水乙醇和1/10体积3mol醋酸钠(pH4.0),?C70℃保存

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